Strossmayerov trg 4, HR - 10000 ZAGREB
tel.: (01) 459 44 44, faks: (01) 459 44 69
E-mail: ured@znanost.hr
SVIBOR - Prikupljanje podataka o projektima u RH
Šifra projekta: 1-08-216
MODULACIJA NK-AKTIVNOSTI LEU I MET-ENKEFALINOM
Glavni istraživač
: GABRILOVAC, JELKA (12736) Suradnici
MARTIN-KLEINER, IRENA (56662)
Tip istraživanja: temeljno Trajanje od: 01.01.91. do 31.12.93. Ukupno radova na projektu: 34
Radovi na projektu citirani u Current Contents: 10
Naziv ustanove: Institut "Ruđer Bošković", Zagreb (98) Odjel/Zavod: Odjel eksperimentalna biologija i medicina Adresa: Bijenička c. 54, p/p/ 1016, 10000 Zagreb Grad: 10000 - Zagreb, Hrvatska
Komunikacija
teleFaks: 385 (0)1 425-497
Telefon: 385 (0)1 4561-111
teleFaks: 385 (01) 425-497
E-mail: gabrilovac olimp.irb.hr
Sažetak: Ispitivana je sposobnost endogenih opioidnih peptida Leu- i Ť
Met-enkefalina (LENK, MENK) da moduliraju citolitičku aktivnost Ť
NK-stanica in vivo i in vitro. NK-aktivnost određđivana je 2 Ť
sata nakon intraperitonealne (i/p) injekcije enkefalina (7.5 ili Ť
10 mg/kg) u CBA miševe, odnosno nakon 18 sati inkubacije Ť
ljudskih limfocita s enkefalinima širokog raspona koncentracija Ť
(10-7 M do 10-14 M). Oba enkefalina dvosmjerno su modulirala Ť
(stimulirala i/ili suprimirala) NK-aktivnost in vivo i in vitro. Ť
Dvosmjerna modulacija NK-aktivnosti LENK-om/MENK-om bila je Ť
praćena dvosmjernom modulacijom sposobnosti ljudskih limfocita da Ť
luče interferon in vitro, odnosno sa dvosmjernom promjenom u Ť
razini sekundarnog glasnika cAMP-a, što upućuje na njihovu moguću Ť
uzročno-posljedičnu povezanost. In vivo, LENK je pored Ť
NK-citotoksičnosti, mijenjao i broj NK-stanica. Osim učinaka na Ť
NK-stanice, LENK je također imao dvosmjeran učinak na Ť
pokretljivost stanica, i nakon in vivo i in vitro tretmana. Ť
Smjer ovog učinka ovisio je o razini unutarstaničnog cAMP-a što Ť
također ukazuje na ulogu cAMP-a u prijenosu signala enkefalina. Ť
Svi navedeni učinci enkefalina samo su se djelomično mogli Ť
dokinuti naloksonom, antagonistom opioidnih receptora, što Ť
ukazuje da se ovi pored opioidnim ostvaruju i neopioidnim putem.
DOPUNA ZA 1994/95
Naša ranija istraživanja su pokazala da endogeni opioidi Ť
enkefalini, mogu modulirati imunološku reaktivnost stanica Ť
slezene miševa nakon in vivo aplikacije (i/p).Također smo Ť
pokazali da se imunomodulatorna aktivnost djelomično može Ť
pripisati njihovoj aktivaciji HPA osovine (može se dokinuti Ť
adrenalektomijom). U nastavku ovih istraživanja željeli smo Ť
ispitati da li se promjena imunoreaktiovnosti izazvana Ť
enkefalinima može pripisati redistribuciji limfocita u Ť
perifernim organima, kao posljedica aktivacije HPA osovine i Ť
porasta glukokortikoida. Nadalje, ispitan je učinak enkefalina i Ť
na izražavanje antigena klase I MHC (H-2k), budući da je slična Ť
interakcija opisana s opioidnim peptidom b-endorfinom. Rezultati Ť
in vivo pokusa pokazali su da Leu-enkefalin (LENK) ne dovodi do Ť
redistribucije stanicau slezeni miševa 2 sata nakon i/p Ť
injekcije. Naime, postotak CD3+, CD4+, CD8+ i sIg+ stanica ostao Ť
je nepromijenjen, kao i gustoća ovih antigena na odgovarajućim Ť
populacijama stanica. Međutim, LENK je utjecao na izražavanje Ť
MHC-I antigena, smanjujući ga na nativnim, a pojačavajući ga na Ť
Con-A-stimuliranim stanicama slezene. In vitro tretman stanica Ť
slezene LENK-om potvrdio je rezultate dobivene in vivo: LENK ne Ť
mijenja izražavanje CD3, CD4, CD8 i sIG, ali mijenja izražavanje Ť
MHC-I, smanjujući ga na nativnim, a pojačavajući ga na Ť
Con-A-stimuliranim limfocitima. Ove se promjene uglavnom odnose Ť
na T limfocite (CD3+), a unutar njih na CD4+, dočim je na CD8+ Ť
limfocitima učinak LENK-a na izražavanje MHC-I bio suprotan. Oba Ť
učinka ovisila su o koncentraciji LENK-a, kao i o populaciji Ť
stanica. Općenito, više koncentracije LENK-a (10-10 M) bile su Ť
potrebne za učinke na nativnim stanicama, a niže (10-12 M) za Ť
učinke na Con-A-stimuliranim stanicama. Dobiveni rezultati Ť
ukazuju na moguću prostornu bliskost receptora za LENK i Ť
antigena MHC-I na mišjim limfocitima, a njihova međusobna Ť
interakcija mogla bi biti jedan od mehanizama ranije opisanog Ť
imunomodulatornog djelovanja enkefalina.
Ciljevi istraživanja: Cilj projekta bio je ispitati sposobnost
endogenih opioida Leu- i Met-enkefalina (LENK, MENK) da moduliraju
citotoksičnu aktivnost NK-stanica. Pokazano je da oba enkefalina mogu
dvosmjerno modulirati NK-aktivnost i in vivo i in vitro. Sudjelovanje
opioidnih receptora u modulaciji NK-aktivnosti enkefalinima ispitano je
koristeći antagonist opioidnih receptora, nalokson. Pokazano je da se
učinci enkefalina na NK-stanice ostvaruju osim opioidnim i neopioidnim
putem. U razjašnjavanju putova prijenosa signala određivane su promjene
razine sekundarnog glasnika cAMP-a nakon in vitro tretmana limfocita
MENK-om. Nađene su dvosmjerene promjene u razini cAMP-a, suprotnog smjera
od promjena NK-aktivnosti, što upućuje nanjihovu moguću
uzročno-posljedičnu povezanost. Pored NK-aktivnosti LENK je, također
dvosmjerno, modulirao pokretljivost mišjih splenocita, interferirajući pri
tome sa metabolizmom cAMP-a na aferentnom i eferentnom kraku. Nadalje,
željelo se ustanoviti da li je modulacija NK-aktivnosti enkefalinom
posljedica promjene njihove citolitičke aktivnosti, ili promjene broja
NK-stanica.Rezultati su pokazali da LENK izaziva promjenu broja
NK-stanica, ali bez direktne povezanosti s promjenama NK-aktivnosti. Na
kraju željelo se ispitati da li u modulacija NK-aktivnosti enkefalinom
uključuje i modulaciju sekrecije interferona, jednog od ključnih
regulatora NK-stanica. Doista, LENK je također dvosmjerno modulirao
poly-I.C-induciranu sekreciju IFN in vitro. Dopuna za 1994/95 U
nastavku ispitivanja enkefalina kao modulatora imunološkog odgovora,
ispitivano je da li je u osnovi njihovog imunomodulatornog djelovanja
redistribucija stanica u limfatičnim organima. Naime, u ranijim radovima,
zamijetili smo da Met-enkefalin (MENK) dovodi do aktivacije HPA osovine i
porasta glukokortikoida, koji bi mogao izazvati redistribuciju limfocita
u perifernim organima. Stoga je ispitan stanični sastav u slezeni CBA
miševa 2 sata nakon i/p injekcije enkefalina, koristeći slijedeće markere:
CD3, CD4, CD8 i sIg, te antigene klase I MHC-sustava (H-2k). Direktni
učinak Leu-enkefalina (LENK) na izražavanje navedenih antigena ispitan je
in vitro koristeći stanice slezene i spomenute membranske markere. Utjecaj
stupnja aktivacije stanica na učinak LENK-a ispitan je aktivacijom
splenocita pomoću Con-A.
SURADNJA - PROJEKTI
Naziv projekta
: >095 Haematologische und immunologische
Untersuchungen von Leukaemie-Erkrankungen verschiedener Genese (Leukaemia,
immunotherapeutic Model) Naziv ustanove: GSF-Forschungszentrum fuer Umwelt und Gesundheit,
Institut fuer Immunologie Grad: 70 - Muenchen, SR Njemačke
SURADNJA - USTANOVE
Naziv ustanove
: GSF'Forschungzentrum fuer Umwelt und Gesundheit
GmbH Institut fuer Immunologie Tip ustanove: Državni institut Tip suradnje: Povremena razmjena stručnjaka Grad: 70 - Muenchen, SR Njemačke